核酸試劑采購介紹

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PCR試劑簡單的理解就是用于做PCR的試劑。

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試劑中不應(yīng)該存在對PCR反應(yīng)有影響的雜質(zhì)。

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像核酸、核酸酶，如果是水的話，鹽離子盡可能的小，最好是超純水。

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像一些鹽類，分析純的可以達(dá)到要求。

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PCR試劑的分類

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1、提取試劑：包括了各種提取DNA的常用試劑,和純化DNA所用的試劑；

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2、PCR擴(kuò)增試劑：主要是taq酶，dntp，緩沖試劑，引物；

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3、產(chǎn)物檢測試劑：瓊脂糖、聚丙烯酰胺凝膠、aps、tmed、eb等等。

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PCR試劑的原理

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PCR的原理是利用DNA在體外攝氏95°高溫時(shí)變性會(huì)變成單鏈，低溫時(shí)引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對的原則結(jié)合，再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度，DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖的方向合成互補(bǔ)鏈。

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PCR最有價(jià)值的應(yīng)用領(lǐng)域就是對感染疾病的診斷。理論上，只要樣本有一個(gè)病原體存在，PCR就可以檢測到。

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PCR試劑注意事項(xiàng)

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1、PCR實(shí)驗(yàn)一定要保管好試劑，防止交叉污染，尤其是交叉使用，極易引起污染。

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2、NA處理最好用硅烷化塑料管以防粘附在管壁上，所有緩沖液吸頭、離心管等用前必須高壓處理，常規(guī)消耗用品用后作一次性處理，避免反復(fù)使用造成污染。

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3、超凈臺內(nèi)設(shè)內(nèi)供PCR用微量離心機(jī)、一次性手套、整套移液器和其它必須品，移液品用一次性吸頭和活塞的正向排液器，防止移液器基部污染。

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4、PCR操作應(yīng)戴手套并勤于更換。

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5、成套試劑，小量分裝，專—保存，防止它用。配制試劑用新器具，用后作一次性處理。

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6、試劑管用前先瞬時(shí)離心，使液體沉于管底，減少污染手套與加樣器機(jī)會(huì)。

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7、引物稀釋時(shí)，要首先瞬時(shí)離心，以避免粉末狀引物在開蓋時(shí)彈出管外。

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PCR試劑的操作流程

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1、試劑準(zhǔn)備階段：

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試劑準(zhǔn)備是PCR操作的第一個(gè)流程，需要在試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)的超凈工作臺或生物安全柜進(jìn)行，用確保無污染的移液器、槍頭及容器等進(jìn)行分裝。

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所有的PCR體系都應(yīng)該在-20C保存，除了ddH 20之外，其余的試劑組份需完全融化之后再加入，以免影響濃度。

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配制反應(yīng)體系應(yīng)在快速進(jìn)行，以減少非特異性擴(kuò)增。

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體系配制完成之后應(yīng)馬上進(jìn)行PCR反應(yīng)。

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2、樣本制備階段：

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樣本制備是整個(gè)PCR反應(yīng)中最為關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，在接收樣本時(shí)一定要確保樣本的密封性以及樣本編號的唯一性。

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嚴(yán)格遵守操作規(guī)程進(jìn)行加樣操作，操作時(shí)候盡量少說話或者不說話。

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所有操作需要在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，操作前后生物安全柜需要進(jìn)行紫外燈消毒，注意生物安全柜中物品的排放。

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3、核酸擴(kuò)增：

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在核酸擴(kuò)增環(huán)節(jié)需要選擇質(zhì)量好的EP管，裝入反應(yīng)體系的EP管上機(jī)前混勻、離心，將管壁及管蓋上的液體甩至管底部。

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在樣本檢測的同時(shí)設(shè)立對照。

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同時(shí)嚴(yán)密檢測PCR擴(kuò)增儀的各項(xiàng)性能指標(biāo)，其中對PCR擴(kuò)增儀而言溫度控制就意味著質(zhì)量。

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如何選購PCR試劑

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一般試劑盒主要是針對酶分類，其次是分為簡易操作混合體系和分開單獨(dú)體系。

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先說酶，你的基因如果是小于2K，那么普通的高保真酶就可以滿足。

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如果是長片段就選擇各公司針對長片段設(shè)計(jì)的酶。如果不需要對序列保真度要求很高，只需要鑒定一下，那么普通的taq酶就夠了。

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針對體系問題，如果你的基因有文獻(xiàn)參考成熟的體系，那么一般就定混合體系那種premix的就可以，如果對Mg離子等有特殊要求，就選擇分開自己配體系那種。